Buenas!
Ayer hicimos en el lab algo espectacular, la verdad que me quedé con la boca abierta!
Por vía intravenosa, inyectamos un anticuerpo conjugado con un fluorocromo (Alexa 488, verde) a un ratón sano. Esperamos 20 minutos y sacrificamos al animal. Se extrajo el órgano de interés, se congeló con OCT y se guardó a -80ºC.
Al día siguiente, se hicieron cortes del bloque a 5, 8 y 10 um, se fijó el tejido y se montó para observar al microscopio. Así, directamente, tal cual!
Y qué vimos??????? Pues un marcaje en verde de membrana precioso, en la zona esperada, sin backgrounds ni nada por el estilo!!!
Nada tenía que envidiar a un tejido sin teñir al que se le ha hecho una immunohistoquímica, eso sí, los cortes deben ser gordos, porque a 8 micras no se veía tan claro, y menos todavía a 5.
¿Qué os parece? A mi, que es increíble, que en tan sólo 20 minutos veas una respuesta del animal "in situ".
Creo que el problema de este protocolo es que gastas demasiado anticuerpo.
ResponderEliminarCon 2ug es suficiente.
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